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                            上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學上游工具類企業,聚焦于細胞生物學相關的化學技術及相關產品的開發與生產,產品覆蓋細胞培養,細胞轉染及細胞檢測等多個科研場景。 世途科生物致力于將自己打造成為全球客戶信賴的中國生命科學工具品牌,助力全球科研工作者在生命科學的探索之旅中不斷取得突破。

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                            杭州RIP免疫沉淀磁珠應用 上海世途科生物科技供應

                            2024-06-11 04:20:38

                            免疫沉淀技術(Immunoprecipitation,簡稱IP)是一種生物化學方法,它利用特異性抗體對抗原進行親和純化。在含有目的抗原的細胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads(預先將Protein A/G固定結合在磁珠上),根據抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性,形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復合物,清洗離心后去除溶液中未結合的雜蛋白,檢測是否存在目的蛋白。 免疫沉淀技術常用于從細胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測或其他檢測技術的蛋白和其他生物分子。它的目標是分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質。 免疫沉淀技術IP的優缺點是什么?杭州RIP免疫沉淀磁珠應用

                            免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體與特定蛋白質結合的特性,從復雜樣本中分離和純化目標蛋白質的實驗方法。這項技術在生物醫學研究中有著廣泛的應用場景,以下是一些主要的應用領域: 1. 蛋白質相互作用分析:通過免疫沉淀技術,研究人員可以研究蛋白質之間的相互作用,揭示蛋白質復合物的組成以及它們在細胞內的功能和調控機制。 2. 抗體藥物開發:免疫沉淀技術可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性,評估抗體藥物的親和力和特異性,指導抗體藥物的設計和優化。 3. 蛋白質表達水平分析:通過比較不同條件下的免疫沉淀結果,可以評估目標蛋白的相對量,進而研究蛋白質的表達調控。 4. 染色質免疫沉淀(ChIP):這是一種特殊的免疫沉淀技術,用于研究蛋白質與DNA的相互作用,如轉錄因子或組蛋白修飾與基因組特定區域的結合情況。 5. RNA免疫沉淀(RIP):類似于ChIP,RIP用于研究RNA結合蛋白與RNA分子之間的相互作用。 廣州蛋白免疫沉淀磁珠多少錢免疫沉淀選瓊脂糖珠還是磁珠?

                            RIP實驗步驟通常包括: 1. 細胞收集與交聯:培養細胞至適當密度。使用交聯劑(如甲醛)進行交聯,以固定蛋白質-RNA復合物。 2. 細胞裂解:收集細胞并進行裂解,釋放RNA-蛋白質復合物。在裂解過程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質降解。 3. 超聲處理:使用超聲波破壞細胞,獲得更小的染色質片段,這有助于后續步驟中抗體的接觸。 4. 除去細胞碎片:通過離心去除細胞碎片和未裂解的細胞,收集含RNA-蛋白質復合物的上清液。 5. 免疫沉淀:將針對特定RNA結合蛋白(RBP)的抗體加入到上清液中。孵育一段時間,使抗體與目標蛋白充分結合。 6. 捕獲免疫復合物:添加蛋白A或蛋白G結合的磁珠或瓊脂糖珠。孵育使抗體-蛋白質-RNA復合物與珠子結合。 7. 洗滌:多次洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質和RNA。 8. 洗脫與逆轉交聯:使用適當的緩沖液洗脫免疫復合物。使用蛋白酶K處理樣品以逆轉交聯,釋放RNA。 9. RNA提取與純化:從免疫沉淀樣品中提取RNA,并進行純化。 10. RNA分析:使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA,以確定與目標蛋白相互作用的RNA種類。

                            免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因: 1. 非特異性蛋白污染 如果洗脫所得抗原純度較低,則有幾種方法可以進行優化。在結合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結合的組分。使用普通微珠預純化樣本還可以降低非目標分子的共純化。此外,還可以使用無關蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。 2. 抗體污染 使用蛋白A、G或A/G的經典免疫沉淀實驗中會出現抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析,則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進行實驗,如Pierce 直接 IP 或交聯 IP 的形式。 免疫沉淀技術RIP的原理是什么?

                            Co-IP(Co-Immunoprecipitation,共免疫沉淀)的實驗方法通常包括以下步驟: 1. 細胞培養與裂解:細胞在適宜的培養條件下生長到適當的密度。 蛋白質分離:裂解后的細胞混合物通過離心去除未破碎的細胞碎片和未裂解的細胞。收集上清液 2. 抗體的添加:將特異性抗體(針對目標蛋白質的抗體)加入到裂解物中。 3. 免疫復合物的形成:抗體與目標蛋白結合后,形成免疫復合物。 4. 親和介質的使用:向混合物中添加蛋白A或蛋白G結合的珠子(如瓊脂糖或磁性珠子)。 5. 免疫復合物的捕獲:將混合物與珠子孵育一段時間后,使用磁鐵或離心的方法將珠子收集起來,同時捕獲了與之結合的免疫復合物。 6. 洗滌:洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質和其他分子。 7. 洗脫:使用適當的緩沖液將免疫復合物從珠子上洗脫下來,常用的緩沖液包括SDS樣品緩沖液,用于后續的電泳分析。 8. 蛋白質分析:洗脫的蛋白質可以通過SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot、質譜分析等方法進行進一步分析。 9. 實驗對照:實驗中應包括陽性對照和陰性對照,以確保實驗結果的可靠性。 10. 數據分析:對實驗結果進行分析,確認目標蛋白是否成功沉淀,并鑒定任何可能的相互作用蛋白。 免疫沉淀技術的綜述。廣州anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠現貨

                            免疫沉淀RIP抗體的選擇?杭州RIP免疫沉淀磁珠應用

                            免疫沉淀(IP)實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。 3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應用驗證:選擇已經過免疫沉淀(IP)或相關應用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。 5. 供應商信息:選擇信譽良好的抗體供應商,并查看供應商提供的技術數據和客戶評價,以幫助做出決策。 杭州RIP免疫沉淀磁珠應用

                            世途科生物CYTOCH立足于科研,憑借著強大的研發實力和嚴謹的質量管理,通過與學術界和產業界的KOL合作,加快客戶科研成果的轉化速度,不斷推動行業的發展。CYTOCH持續關注生命健康相關的科學研究,開拓化學與生物結合的新思路,為全球用戶供應質量的產品。CYTOCH將攜手客戶共同探索生命與健康的奧秘,為人類健康做出更大的貢獻。一直以來,中國的生物試劑市場被國外品牌主導,國內品牌往往只能在低利潤和低技術含量的市場中苦苦競爭,品牌間的內卷導致其無法專注產品本身質量而始終無法突破國外品牌的市場格局。CYTOCH致力于成為客戶信賴的中國品牌。

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